鹽溶液直接在280nm下測(cè)UV為什么不穩(wěn)定?

問(wèn)題描述： 表示紫外分光酣籂豐餃薟祭奉熄斧隴光度計(jì)在波長(zhǎng)為280nm處的吸光度值，由于在280nm處，蛋白質(zhì)有一個(gè)明顯的吸收峰，因此在此波長(zhǎng)下蛋白質(zhì)的濃度與吸光度值呈線(xiàn)性關(guān)系，可以定量表示蛋白質(zhì)在溶液中的含量

回答(1). 紫外吸收檢測(cè)DNA濃度與純度2007年11月13日 星期二 11:40目的： 了解紫外吸收檢測(cè)DNA濃度與純度的原理,掌握測(cè)定方法. 原理： 核酸的最大吸收波長(zhǎng)為260nm,蛋白質(zhì)為280nm,在波長(zhǎng)260nm時(shí),1OD值相當(dāng)于雙鏈DNA濃度為50μg/ml,單鏈 寡核苷酸的含量為30μg/ml,可以據(jù)此來(lái)計(jì)算核酸樣品的濃度,還可通過(guò)測(cè)定在260nm和280nm的OD值的比值 （OD260/OD280）,估計(jì)核酸的純度.純凈DNA的比值為1.8, RNA為2.0.若比值高于1.8說(shuō)明DNA樣品中的RNA尚未除 盡,若樣品中含有酚和蛋白質(zhì)將導(dǎo)致比值降低.270nm存在高吸收表明有酚的干擾. 紫外分光光度法只能用于測(cè)定濃度 大于0.25μg/ml的核酸溶液,對(duì)濃度更小的樣品,可采用熒光分光光度法. 試劑與儀器： 提取的質(zhì)粒DNA,紫外分光光度儀. 操作步驟： 1) 分光光度計(jì)先用水在260nm和280nm兩個(gè)波長(zhǎng)下校零. 2) 取質(zhì)粒DNA樣品2μl,用水稀釋100倍,轉(zhuǎn)入分光光度計(jì)的石英比色杯中. 3) 在260nm和280nm分別讀出樣品光密度值.如果樣品濃度單位為μg/μl,則樣品DNA濃度為OD 值的10倍,即如 OD260=0.1,則樣品濃度即為1μg/μl. 4) 若OD260/OD280大于1.8,說(shuō)明仍有RNA,可以考慮用RNA酶處理樣品,若小于1姬俯灌謊弒荷鬼捅邯拉.8,說(shuō) 明樣品中含有蛋白質(zhì)或酚,應(yīng)再用酚/氯仿抽提,以乙醇沉淀純化DNA.

回答(2). 蛋白質(zhì)組成氨基酸中的苯丙酮酸、酪氨酸和色氨酸含有苯環(huán)共軛雙鍵，具有光吸收能力。苯丙氨酸的最大吸收護(hù)浮篙簧蕻毫戈桐恭昆波長(zhǎng)在259，酪氨酸最大吸收波長(zhǎng)在278，色氨酸最大吸收波長(zhǎng)在279。一般采用紫外分光光度計(jì)在在280nm處測(cè)量。

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